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培养基配制标准操作步骤

2020-03-02

实验步骤
1  培养基母液的母液的配制
由于组培的植物不同,需要配制不同的培养基,为减少工件量,可把药品配成浓缩液。有些微量元素和有机成分成分浓度极低,因此,先配制成母液的母液。建议浓度如下表: 
 
母液的母液的配制过程:
(1)根据表中的浓度,称取50ml体积的药品的质量。
(2)加入到相应的溶液中,定容至50ml。
(3) 放入密封50ml塑胶管中,-20℃保存。

2  培养基母液浓度表:
(1)MS-A(macro):为工作液浓度的50倍
(2)配制1升工作液,烧杯中放入700ml左右的蒸馏水,按顺序分别吸取MS-A母液20ml、MS-B母液10ml、MS-C母液10ml、MS-D母液10ml、MS-E母液10ml。
(3)加入固体蔗糖30g(根据具体实验调节浓度),溶解。
(4) 加入所需的激素。定容至1000ml。
(5)0.1-1mol/l的HCl或NaOH调整pH值。
(6)如果配制固体培养基加入一定浓度的琼脂。琼脂浓度为10%~15%。
(7) 液体培养基可选择高温高压灭菌和过滤消毒2种方法。固体培养基采用高温高压灭菌方法。倒入
三角瓶等培养器皿中,封口消毒。
(8)工作液配制的注意事项:
 由于培养基内有丰富的营养物质,极利细菌和真菌繁殖,造成污染,影响组培的成功,一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。
高温高压消毒: 一般用消毒锅消毒,注意消毒锅不能装的过满,锅内保持1.1Kg/cm2的压力,温度120℃左右,大约15-20分钟即可。
过滤消毒: 一些易受高温破坏的培养基成分如IAA、IBA、ZT等,不宜用高温高压法消毒,可用过滤消毒,可过滤消毒后再加入已高温高压消毒的培养基中,过滤消毒应在无菌室或超净工件台上进行,以避免污染培养基。

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