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我司针对植物安排样本的处理方法解析

2020-06-02

 提醒搜集标本前有必要清楚要检测的成份是否满足安稳。对搜集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需求周期搜集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。防止反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需增加抑肽酶。以下针对植物安排样本的处理方法进行说明:欢迎参阅使用。
一、匀浆介质
一般选用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定目标的状况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。
二、安排匀浆的制备
1、取安排块(0.2g~0.5g)可到5~10mg在严寒的PBS中漂洗,滤纸拭干,精确称重,放入5ml的匀浆管中。
2、按重量(g):体积(ml)=1:4的比例参加4倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪赶快剪碎安排块。
3、匀浆的方法:手工匀浆,机器匀浆。
① 手工匀浆:左手持匀浆管将下端刺进盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆笔直刺进套管中,上下滚动研磨数十次(6~8分钟),充沛研碎,制成20%的匀浆液。
② 机器匀浆:用安排捣碎机10000~15000 转/分 上下研磨制成20%安排匀浆,也可用内切式安排匀浆机制备(匀浆时刻10秒/次,间隙30秒,接连3~5次,在冰水中进行,可适当延伸匀浆时刻),
镜检调查:取少数安排匀浆作涂片(直接涂片、染色均能够),显微镜下调查细胞是否破碎,若没有则可延伸匀浆时刻。
4、将制备好的20%匀浆液用一般离心机或低温低速离心机4000转/分左右,离心10~15分钟,取上清液进行测定.
三、样本保存:
        植物安排样本暂时不测定,可当即低温冻存,温度越低越好,中心如不反复冻融,-20℃以下可保存三个月,-70℃以下可保存六个月。
        制备好的匀浆液主张不要冻存,当天进行测定,如放置时刻过长相关酶活会有所下降,部分目标4℃可寄存3~5天(如SOD要寄存2~3天,MDA可寄存3~5,总蛋白测定可存5~7天等)

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